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波长色散X射线荧光光谱仪精度测定标准制订完成

波长色散X射线荧光光谱仪精度测定标准制订完成

2021-08-20

波长色散X射线荧光光谱仪是X射线光谱仪的两大分类之一,适用于各种固体材料或液体,广泛应用于钢铁、冶金、石化、地质、环保、材料、电子等领域。

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【收藏】LC-MS/MS定量分析的四步曲

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1. 准备工作

● 查阅文献
● 做好样品前处理,萃取浓缩分离纯化
● 有条件的可先在HPLC上摸好LC条件,能够基本分离更好,缓冲体系符合MS要求
● 溶剂包括水的纯度,最好色谱纯以上
● 新的色谱柱可能要先冲洗很长时间才能干净,某些样品非常容易吸附在进样阀和管路中,用溶剂清洗
● 质谱仪须校准,预热时间要足够长,气流的稳定也很重要,液N气阀开度要注意,达到稳定程度

2. MS条件优化——先定性后定量

● 首先,确定离子化方式:
ESI or APCI,POS or NEG
● 用10-100ppm的纯样,Q1 SCAN 察看存在哪些离子,要能够看到待测的母离子,应明显比周围的噪声离子高,通过改变DP,观察离子的增减,若为POS方式,看M+1,M+18,M+23等等,初步判断分子离子,如看不到则可能是浓度太低或离子化方式不合适,或选择的溶剂体系不合适
● 母离子选M+H,或M-H最好,但有时只有M+NH4,M+Na等,这样CAD能量可能需要高些,选择[M+H]+,还是+NH4,+Na等,要由化合物决定。加合离子若稳定,则可用,不稳定则可能需换流动相,但+H通常好些,所需碰撞能量低,灵敏度高;如含Cl可选择2个母离子峰
● SIM与MRM,单级Q只能SIM,MRM可看成2个SIM,选择性更好
● 再根据上一步确定的母离子进行PRODUCT SCAN,确保所有碎片离子都来自待测化合物,而不是溶液中的杂质,找出较强的碎片离子信息。还可改变CE,从中选定MRM需要测定的一对或更多离子对,为最后LC-MS/MS联用做准备
● 做PRODUCT SCAN时,注意小数点后的位数,MRM输入要准,灵敏度才高
● 先多选几个离子对,待出现基质干扰时可换,最后根据法规要求确定离子对数目
● MRM方式优化仪器,通过优化仪器参数,使得母、子离子都达到一定强度水平,使MRM灵敏度最高。可先让仪器自动优化参数,然后再手动细致优化,只检测一对离子时根据TIC的强度来确定仪器参数,一次优化多对离子时,要根据每对离子的XIC强度来分别确定仪器参数
● 先用注射泵优化COMPOUND项下面的参数,如DP、CE及CAD等,再接通LC,用FIA优化其他参数如温度,气流和IS电压及离子源位置,或接一个三通,样品仍由注射泵进入离子源,同时LC保持需要的流量. 然后进行MRM测定。
● CURTAIN GAS在不降低灵敏度情况下尽量大些,雾化辅助加热气流不用太大,这样可以提高信噪比,保持信号稳定。
● 分辨率的选择:当样品较纯,Q3可选LOW,提高灵敏度,若选LOW后本底噪声太高则意义不大。

3. LC条件优化

● 色谱柱长度可根据分离的要求而定,定性可长些,定量在能有效排除干扰情况下尽量短,提高效率;内径最好选细径柱如2mm的,1mm的,IS可不分流, 4.6mm柱用1ml流量时如不分流灵敏度还不是最佳,不如流量低时更好。流速高,峰形好
● 不同牌号色谱柱,效果很可能不同
● PH的影响-正离子方式PH要低些,负离子方式PH要高些,除对离子化有影响外,还影响LC的峰形,以至定量误差。流动相加乙酸铵可适合大部分测定要求
● 用流动相配的标样,初步优化确定LC条件是否合适
● 标准品工作液现配现做,尤其是较低浓度,时间长了可能因吸附分解等降低
● 进样顺序要先稀后浓
● 洗针液要常换,进过浓样后要进一针空白,检验是否有残留污染
● 顺序:纯样-添加样-实际样品
● 流动相液优化后,空白提取液配制标准再优化,看干扰,空白添加再提取后看回收率
● 用空白提取液配制标准样做曲线,准确,有效排除干扰因素
前处理方法的优化
● LC,MS都优化还不行,改提取方法
● 离子抑制-改变前处理方法或LC条件
● 内标用法,药代动力学时多采用内标,选择原则:内标物与被测物的化学性质有区别时,要注意干扰基质对他们的离子化影响的不同,尽量选同系物。还可利用同位素标记
● 衍生化:有时有助于信号强,且稳定,例如硝基呋喃类,衍生化
后容易测量。

4. 数据处理


● 最低检出限,信噪比~3:1,定量限~10:1
● 同一物质几对离子的比例应相对恒定,误差不超过15%,峰面积比峰高准确
● 当浓度低,信号弱,自动积分不准时可对峰面积手动积分
● 平滑次数与峰宽因子、保留时间等设置都会影响积分值
● 曲线过零点时,可用4个点;不用,则要5个点
● 线性范围太宽,有时意义不大

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